Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的更进一步中逐渐扩展

从第一次经常不止现家兔自身免疫反应到经常不止现1M-冠心病临床病因的十分困难率在儿童时期就有以致于好的描述，多个家兔自身免疫反应特征性的儿童当中有70%在人体内转换后10年内患上冠心病，而随访15年的儿童这一数目上升到84%。比较于之下，占临床1M-冠心病一半以上的M-1M-冠心病的病症的系统还并未给予应有的学术研究。

更加多的人开始采用仍须系统来定义1M-冠心病的十分困难：变异在经常不止现多种家兔自身免疫反应时进入第1前期，经常不止现胰岛素异常时进入第2前期，经常不止现病因时进入第3前期。一些多发家兔自身免疫反应特征性的变异，在1期和2期，十分困难以致于快速，并其发展为病症的1M-冠心病。我们之前描述了两组成员在首次检验到多种家兔自身免疫反应结果推测后有数10年无冠心病的以致于慢速十分困难者，这组成员病征总人数少，但外观上非常恰当。随后，我们发现家兔自身蛋白质特异性CD8+T肝细胞反应在十分困难缓慢速的病征当中基本不存在，但在近期病症和长期存在的冠心病病征当中很容易检验到。这有可能证明，与十分困难病征比较于，这些病征自身免疫反应的抑制增强。

早期学术研究证明，尽管抑制性T肝细胞(Treg)为数正常，但冠心病病征存在一些特性缺陷，其当中包括对IL-2的反应意志力减少。此外，冠心病病征当中的波动CD4+T肝细胞有可能对抑制更为重要抵抗性，展示出为波动T肝细胞的选择性西移动，自然消除的Treg和灌注消除的作用于Treg，以及蛋白质境遇的CD4+T肝细胞当中IL-2反应西移动。本学术研究的借此是描述了CD4+抑制性T肝细胞(Treg)在一个大以致于缓慢速十分困难者当中的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学术研究是一项以群体为基础的主干学术研究，在21岁以下确诊的病征亲人当中检查1M-冠心病的有有可能因素。我们之前描述了长期缓慢速十分困难者的外观上，他们保证多重家兔自身免疫反应特征性大约10年，但并未经常不止现冠心病的临床病因，慢速性或非展开性自身免疫。随后，10名在此之后保证无冠心病并希望缺少大量血液循环结果推测的缓慢速十分困难者纳入T和B肝细胞特性系统性。在迄今的学术研究当中，8名慢速十分困难者(SP组成员)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身免疫反应特征性。所有的参与者都处于1M-冠心病十分困难的1期，尽管一些人随后一落千丈了家兔自身免疫反应对某些蛋白质的特征性反应，然而，一名病征已经处于2期有数6年，但并未经常不止现临床病因，一名病征被诊断为冠心病，该受试者72岁，在采集实验结果推测时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性当中对该丝氨酸展开了单独评核能。受控外周血单个核能肝细胞(PBMCs)，采用多模板流式肝细胞拳法和T肝细胞选择性试验评核能丝氨酸当中Treg的Hz、表M-和特性。采用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和复归)展开无指派聚类系统性，评核能Treg表M-。

结果：与有益丝氨酸比较于，来自慢速十分困难体的清醒CD4+T肝细胞的指派聚类推测，介导的清醒CD4+ TregHz上升，与免疫抑制作用于的TNFR涉及细胞(GITR)重申上升有关。一名HbA1c急剧下降的病征与十分困难缓慢速者和反之亦然的对照组成员比较于，Treg可知有所各有不同。特性系统性证明，与有益丝氨酸比较于，来自缓慢速十分困难体的Treg介导的CD4+波动T肝细胞选择性明显受损。展示出为对波动CD4+T肝细胞CD25和CD134重申的选择性上升。

示意图1 熟悉的表M-系统性推测，CD4+Treg亚M-在慢速十分困难表头当中上升。由FlowSOM分解成的Treg一楼，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标有物重申解剖不止10个元簇:清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;内核能Treg_1;内核能Treg_2;内核能Treg_3;和内核能Treg_4。(a)采用9个各有不同Treg标有分解成的10个元簇的MST。每个节点代表一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在节点组成员周围成品。每个节点当中的饼示意图声称单个标有的重申分级。(b)每个元聚类的热示意图，以推测总体标有重申。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)分解成示意图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较金属量为每个metacluster装等分(金属量> 0.05%)未确定为HD和SP组成员:内核能Treg_2 (e),内核能Treg_3 (f),内核能Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T肝细胞(l)。黄色带子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 采用CITRUS的预测模M-确认，TregHz的上升是十分困难缓慢速的标志。分级相关联(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP参与者和反之亦然的HD参与者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的关联性。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团体的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR重申展开受控，模拟FlowSOM小团体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组成员以及丝氨酸SP 606(黄色)当中CD25+ cd127的Hz汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联子集的装等分;(c) HLA-DRloGITR−(内核能Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核能Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核能Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核能T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3重申强度制做，箭头突不止的簇被比对为SP和HD表头之间的各有不同。(j)装等分推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员当中，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的比较金属量(数目)。(k)直方示意图推测每个簇的表M-(粉红色)和Treg标有比较重申与背景重申(黄色);上列，内核能Treg_3;示意图即刻，内核能Treg_4。背景与所有其他簇当中标有的重申有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩检验

示意图3 与有益献血者比较于，十分困难缓慢速者清醒treg的GITR上升。每个清醒CD4+T肝细胞元簇(清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;内核能Treg_2;内核能Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个重申标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的重申热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇当中所有HD(棕色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR重申结合，推测直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对表示法秩和检验，p< 0.07(黄色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(黄色)丝氨酸SP 606和反之亦然的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR重申，从分级相关联，从所有HD(棕色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)结合，推测直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对表示法秩检验

示意图4 来自缓慢速十分困难的CD4+ treg肝细胞控制波动CD4+T肝细胞的意志力减少。SP组成员用黄色的支线和带子声称，HD组成员用白色的支线和带子声称，黄色的支线/带子声称丝氨酸sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞展开分选。CD4+CD25−(此番者)被标有为CFSE, Treg按通过观察的数目溶液。用抗CD3 /28微珠酪氨酸肝细胞，指导3同月展开流式肝细胞拳法检验。(a-d)与CD4+此番者比较应的treg指导(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者指导。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE选择性比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性比例。采用特征性对照(介导的响应肝细胞另有treg)计算选择性比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 波动CD4+T肝细胞对缓慢速十分困难的T肝细胞酪氨酸的选择性更敏感。SP组成员用黄色的支线和带子声称，HD组成员用白色的支线和带子声称，黄色的支线/带子声称丝氨酸sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞展开分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标有，treg按通过观察的数目溶液。用抗CD3 /28微珠酪氨酸肝细胞，指导3同月展开流式肝细胞拳法(CD25反染)和肝细胞因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同指导。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE选择性百分率(b)。(c,d) CD25选择性百分率(c)和CD134选择性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导当中的重申。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们断定的结论是，来自缓慢速十分困难子的酪氨酸清醒CD4+Treg在GITR重申当中给予了扩展和丰富，重申了进一步学术研究Treg在1M-冠心病风险变异当中的差异性的有效性。

注解不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28